Pytanie:
Co się stanie, jeśli autoklawujesz HEPES?
Superbest
2014-09-03 10:49:20 UTC
view on stackexchange narkive permalink

Wiele protokołów biologii molekularnej zawiera zalecenia dotyczące sterylizacji roztworów HEPES (kwasu 4- (2-hydroksyetylo) -1-piperazynoetanosulfonowego) w autoklawie.

Podobno HEPES jest niestabilny termicznie, a do sterylizacji używa się wysokich temperatur w jakiś sposób pogarszają działanie bufora lub może generują niepożądane związki chemiczne (to spekulacje z mojej strony; często widziałem rady, aby nie autoklawować HEPES, ale nigdy nie widziałem niczego o dlaczego nie ). Zazwyczaj autoklawy ogrzewają roztwory do 121 ° C i zwiększają ciśnienie do nieco powyżej 2 atm, czyli o około jeden stopień poniżej temperatury wrzenia wody. To środowisko jest utrzymywane przez 20 minut w celu zniszczenia biologicznych zanieczyszczeń.

Często widziałem to twierdzenie, ale miałem problem ze znalezieniem rzeczywistego źródła lub uzasadnieniem, dlaczego HEPES nie powinien być autoklawowany. Czy pojawiła się publikacja, w której faktycznie próbowano podgrzać bufor HEPES do temperatur autoklawu (121 ° C) i zobaczyć, co się stanie? Jakie dokładnie są konsekwencje, szczególnie w odniesieniu do biologicznych zastosowań HEPES (tj. Buforu pH)?

Trzy odpowiedzi:
LDC3
2014-09-04 06:27:47 UTC
view on stackexchange narkive permalink

Od stąd:

Niektórych buforów (np. MOPS i HEPES) nie można autoklawować, ponieważ ulegają degradacji podczas ogrzewania.

i tutaj:

[HEPES] Roztwory mogą być autoklawowane w standardowych warunkach.

Chyba nikt nie zna odpowiedź.

Więc nie ma nawet co do tego konsensusu. Ciekawy! Niestety, źródło drugiego roszczenia, Medzon i Gedies 1971, jest płatne i poza moim zasięgiem, więc trochę tam utknąłem.
Przepraszam, ja też nie mam do niego dostępu. Jest prawdopodobne, że autoklawowali roztwór HEPES i odkryli, że nadal nadaje się do użytku. Może się zdarzyć, że niektóre autoklawy mają nieco wyższą temperaturę roboczą (np. 125 ° C), więc HEPES jest bardziej podatny na degradację w tych autoklawach.
Superbest
2014-09-05 07:22:29 UTC
view on stackexchange narkive permalink

Dzisiaj przetestowałem zestaw kompetentnych E. coli , które przygotowano przy użyciu roztworu buforowego chlorku wapnia na bazie HEPES. Roztwór sterylizowano w autoklawie, jak opisałem w odpowiedzi.

Uzyskałem dobrą wydajność transformacji z tych komórek, a żywotność również nie została zauważalnie zakłócona. Przygotowanie mojego roztworu wiąże się z kilkoma problemami, które mogą wpłynąć na wydajność transformacji, ale podsumowując, autoklawowanie HEPES nie zniweczyło jego zdolności do nadawania komórkom kompetencji chemicznej.

Spekuluję dalej i powiem, że autoklawowanie HEPES może degradować niektóre cząsteczki HEPES lub powodować reakcje i generować nieoczekiwane podgatunki - ale oba z nich będą generowane w małych, nieznacznych ilościach, które nie powinny mieć wpływu na większość zastosowań biologicznych.

Oleksiy Boldyriev
2017-02-10 21:12:13 UTC
view on stackexchange narkive permalink

Czytałem artykuł Medzon & Gedies. Autoklawowali podłoże HEPES i nie zauważyli statystycznej różnicy między nim a roztworem wodorowęglanu w hodowli komórkowej. Nic nie mówi się o niemożliwości autoklawowania HEPES.



ⓘ
To pytanie i odpowiedź zostało automatycznie przetłumaczone z języka angielskiego.Oryginalna treść jest dostępna na stackexchange, za co dziękujemy za licencję cc by-sa 3.0, w ramach której jest rozpowszechniana.
Loading...